RPMI1640干粉培养基配制培养液(2000ml)

基础培养液的配制（2000ml） RPMI1640 基础培养液的配制（2000ml）
一、材料 1、 2500ml 广口立瓶（先用 1%稀盐酸溶液浸泡 12 小时，自来水中加洗涤剂用毛刷仔 细洗净内部， 用自来水冲洗干净 （加满水倒空达 10 次以上） 最后用重蒸水浸洗 2~3 ， 次。然后干烤灭菌（170C，4 小时） 。 2、 双馏水。临用前 3 天内准备，使用石英双馏纯水器制备，上样水为科技处制备的纯 净水。蒸出后收集到 1 万 ml 立瓶中（干净且灭菌者） ，加塞密封。用电导仪测电阻 率需在 1.5×10E6Ω·cm 左右，最低不能低于 1.0×10E6Ω·cm。 （电导率为 1.0μ S/cm 以下） 。 3、 2000ml 量筒（洗净、干烤） 。 4、 RPMI1640 培养基干粉，4000mg NaHCO3。 5、 5ml 枪（枪头需高压灭菌） 。 6、 1N NaOH 或 1N HCl 各 400ml（16g NaOH 溶于蒸馏水中至总体 400ml，0.22u 一 次性滤器过滤除菌；34ml 浓盐酸溶于蒸馏水中至总体 400ml，0.22u 一次性滤器过 滤除菌） 。 7、 电子天平，灭菌的称量用纸和灭菌的药匙。 8、 1000ml 一次性滤器。 9、 500ml 或 250ml 玻瓶（泡酸、洗净、干烤。瓶塞高压） 。 10、 25ml 小烧杯。 11、 酸度计（2 个） 。 12、 电导仪。 13、 渗透压仪。 14、 内毒素测定试剂盒。 15、 15ml 无菌离心管。 16、 CO2 培养箱。 17、 记号笔。 二、方法（在无菌室内操作） 1、 取配培养液专用的 2500ml 广口立瓶，加入在室温保存的 3 天内新蒸馏的双馏水 1800ml。 2、 加入 2 袋 RPMI1640 干粉培养基，轻轻振摇使之分散。不要加热。 3、 用 5ml 枪（枪头需高压灭菌）吸取蒸馏水冲洗包装袋内部，转移全部的痕量干粉到 容器内。 4、 精确称取 4000mg NaHCO3 加到容器中。 5、 加双蒸水至总体积为 1950ml，振摇使溶质充分溶解。 6、 用 5ml 枪（枪头需高压灭菌）取小样测溶液 pH 值。 7、 用已过滤除菌的 1N NaOH 或 1N HCl 调节 pH 值至 7.1±0.1。注意缓慢滴加，边 滴加边振摇。 8、 用双蒸水补足体积至 2000ml。 9、 用 1000ml 一次性滤器过滤除菌，分装到 500 或 250ml 瓶中，注意不要超过瓶体积 的 2/3。 10、 用 5ml 枪（枪头需高压灭菌）取小样测溶液 pH 值、电导、渗透压(渗透压应 为 290±3mOsm/kgH2O，否则应予调整)，记录。

11、 用 5ml 枪（枪头需高压灭菌）取小样测溶液内毒素含量，记录。 12、 用 5ml 枪（枪头需高压灭菌）取小样到 15ml 离心管中，放入 CO2 培养箱中培 养 72 小时，确定有无细菌污染。 13、 用记号笔在瓶壁上标明培养基名称，批号（Lot No.）配制日期、操作者姓名。

细胞培养基使用注意事项
1、 因 RPMI1640 中含有的谷氨酰胺半衰期短，只有 1~3 周，故新配制的培养基使用 2 周后，再使用时，应临时补加谷氨酰胺。补加办法： 1） 100 倍浓缩的谷氨酰胺液使用时加入培养液总体积的 1/100。 2） 100 倍浓缩谷氨酰胺溶液（200mmol/L）的配制：2.9222g 谷氨酰胺，加双馏水 至 100ml，充分搅拌溶解后，过滤除菌。分装小青瓶（每瓶 5~10ml） 。-20C 贮 存。 2、 放入 CO2 培养箱中的培养瓶，务必将瓶盖旋松（只搭上 1 扣即可） ，以使 CO2 气体 能够进入培养瓶中。