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PhosphoProtein Purification Kit (6)
货 号：37101
产品规格：6
原 产 地：德国
参考价格：4600 （参考价格，以实际价格为准）
优惠价格：
PhosphoProtein Purification Kit (6)
37101
亲和层析方法纯化磷酸化蛋白
- 将磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白完全分离
- 试剂盒提供分离柱、缓冲液、试剂和超滤柱等
- 无需放射性标记，就可进行细胞信号转导研究
PhosphoProtein Purification Kit基于亲和层析法，将细胞裂解液中的磷酸化和非磷酸化蛋白完全分离，由此便于研究整个细胞和特定蛋白的磷酸化状态。此外，可方便地确定磷酸化和非磷酸 化蛋白的比率，这对于研究低丰度蛋白是非常有用的。PhosphoProtein Purification Kit包括离心柱、试剂、缓冲液和用于蛋白高效浓缩和脱盐的Nanosep Ultrafiltration Columns。
PhosphoProtein Purification Kit基于亲和层析法，将细胞裂解液中的磷酸化和非磷酸化蛋白完全分离，由此便于研究整个细胞和特定蛋白的磷酸化状态。使用高特异性小鼠单克隆抗体 PhosphoThreonine和PhosphoSerine Western印迹之后鉴定磷酸化蛋白，这两种抗体可辨别由磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸残基组成的表位，而与周围的氨基酸无关（参见Complete separation of unphosphorylated and phosphorylated proteins）。
每个PhosphoProtein Purification Column可从107个真核细胞 中纯化磷酸化蛋白（相当于2.5 mg总蛋白）。细胞溶解于裂解缓冲液中，其中去污剂和核酸酶用于分解蛋白混合物，蛋白酶抑制剂用于防止蛋白降解。将澄清 的裂解液上样到 PhosphoProtein Purification Column，裂解液中的磷酸化蛋白结合到柱子上，非磷酸化蛋白则流过柱子。洗涤之后，从柱子上洗脱磷酸化蛋白（参见Phosphoprotein purification procedure）。 通常，总蛋白的10%为磷酸化蛋白（取决于细胞类型和状态）。两种蛋白都保持生物活性，在有需要的情况下可进一步纯化。PhosphoProtein Purification Kit中提供Nanosep Ultrafiltration Columns，确保蛋白的高效浓缩和脱盐。表格中为应用PhosphoProtein Purification Kit进行分离时，每种蛋白的常规产量。
| 细胞类型 | 细胞数量 | 细胞裂解液中的总蛋白（µg） | 上样到离心柱的蛋白（µg） | 洗脱液中的蛋白 （µg） | 磷酸化蛋白含量百分比 |
|---|---|---|---|---|---|
| CHO | 1.5 x 107 | 3400 | 2500 | 300 | 12% |
| NIH 3T3 | n.d. | 2750 | 2500 | 165 | 7% |
| 293 | 1.5 x 107 | 3650 | 2500 | 200 | 8% |
| Cos-7 | 4.5 x 106 | 1700 | 1700 | 120 | 7% |
| Huh-7 | 8.5 x 106 | 2650 | 2500 | 235 | 9% |
| HT 29 | n.d. | n.d. | 2500 | 200 | 8% |
| LT 23 | n.d. | n.d. | 2500 | 275 | 11% |
| HeLa S3 | 1.8 x 107 | 5950 | 2500 | 280 | 11% |
| HeLa Acc57 | 6.6 x 106 | 2500 | 2500 | 235 | 9% |
PhosphoProtein Purification Kit可完全分离磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白，分离后的磷酸化蛋白适用于以下研究：
- 蛋白组学
- 细胞信号转导和凋亡研究
- 蛋白激酶和肿瘤学研究
- 免疫失调研究