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Ni-NTA Spin Kit (50)
货 号：31314
产品规格：50
原 产 地：德国
参考价格：6270 （参考价格，以实际价格为准）
优惠价格：
Ni-NTA Spin Kit (50)
31314
快速、小规模纯化His-tagged蛋白，同时提供离心柱、试剂、缓冲液和对照质粒
- 15分钟内纯化至多300 µg His-tagged蛋白
- 可在天然和变性条件下纯化
- 一步法即可纯化得到95%的产物
- 即用型离心柱，可用于快速自动化或手工纯化
Ni-NTA硅胶基质通过大孔硅胶与Ni-NTA相结合来优化材料，从而抑制相互之间的非特异性疏水作用。Spin Kit中的Ni-NTA Columns为便捷的小离心柱形式，可便利地处理多份平行样本。适用于功能性筛选工程蛋白质、选择克隆表达性长片段转录产物，以及表达水平比较。每个离 心管可以纯化至多300 µg的His-tagged蛋白。Ni-NTA离心管可以在天然或变性的条件下，一步法纯化蛋白质。Ni-NTA Spin Kit是离心纯化His-tagged蛋白的完整试剂盒。
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System，包括Ni-NTA Spin Columns，原理是基于著名专利技术Ni-NTA（镍-次氮基三乙酸）树脂，用于纯化带有6个或者以上组氨酸残基His标签的蛋白质。该技术能够在天 然或者变性的条件下，从任何表达体系中，一步法纯化大多数His-tagged蛋白。NTA有4个镍离子的螯合位，相比金属-螯合纯化系统只有3个与金属 离子相互作用的位点，能够更紧密地与镍结合。额外的螯合位点防止镍离子脱落，从而拥有更强的结合能力，并且相比于其他金属-螯合纯化系统，该系统能制备更 高纯度的蛋白质。QIAexpress体系可以从任何的表达体系中，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌，纯化His-tagged蛋白。
纯化His-tagged蛋白包括4个步骤：细胞裂解、蛋白结合、洗涤和洗脱（参见Ni-NTA Spin Column purification with the Ni-NTA）。利用QIAexpress系 统纯化重组蛋白并不取决于蛋白质或者His标签的三维空间结构。这一特性能够在天然或变性条件下，一步从稀释溶液或者粗裂解物中纯化蛋白。多至600 μl细胞裂解物可加注到Ni-NTA离心柱上。标签蛋白在2分钟快速离心结合到Ni-NTA硅胶基质上，无标签蛋白则流过基质。在洗涤步骤后，纯化的蛋白 质在温和条件下洗脱（如pH降至5.9，或者加入100–500 mM咪唑）至100–300 μl体积。因为His标签较小，几乎不产生免疫原，通常无 需去除。纯化的蛋白可以立即使用。蛋白质可以从多个小规模的表达培养物中纯化得到，只需约30分钟或者60分钟（自动化的QIAcube全自动核酸纯化仪 操作流程）。强变性剂和清洁剂可以有效地溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体蛋白质。这些试剂能够高效地去除非特异性结合的污染物，可以包含在洗涤缓冲液 中（参见下表）。在温和的条件下，加入100–250 mM咪唑作为竞争物或者降低pH值洗脱纯化的蛋白质。
| 试剂 |
|---|
| 6 M guanidine HCl |
| 8 M尿酸 |
| 2% Triton X-100 |
| 2% Tween 20 |
| 1% CHAPS |
| 20 mM β-ME |
| 10 mM DTT |
| 50%甘油 |
| 20%乙醇 |
| 2 M NaCl |
| 4 M MgCl2 |
| 5 mM CaCl2 |
| ≤20 mM咪唑 |
| 20 mM TCEP |
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System提供可靠的一步法纯化蛋白质，适用于各种应用，包括：
- 结构和功能研究
- 蛋白结晶用于三维结构分析
- 蛋白与蛋白，蛋白与DNA相互作用研究
- 抗体制备