EpiTect Methyl II DNA Restriction Kit制备基因组DNA样品用于DNA甲基化分析，使用EpiTect Methyl II PCR Assays和EpiTect Methyl II PCR Arrays对单独或一组已知的或预测的甲基化CpG岛进行甲基化分析。采用试剂盒中含有的酶和缓冲液获得4种降解产物以检测不同的甲基化DNA片段。模 拟降解产物（Mo）包含所有的内源性基因组DNA 。甲基化敏感限制性内切酶（酶A）降解产物（Ms）包含高度甲基化DNA序列，而甲基化依赖性限制性内切酶（酶B）降解产物（Md）包含非甲基化DNA序 列。双重降解产物（Msd）检测两种酶降解产物的背景和可行性。

将等量基因组DNA样品加入到4个不同的离心管中并加入缓冲液和限制性内切酶。模拟降解产物（Mo）无需加酶；酶A加入到 甲基化敏感限制性内切酶降解产物（Ms）中；酶B加入到甲基化依赖性限制性内切酶降解产物（Md）中。两种酶都加入到双重降解产物（Msd）中。所有的降 解产物都在37°C孵育6小时或整夜。最后将酶在65°C加热20分钟进行失活处理。

为了得到较好的结果，EpiTect Methyl II DNA Restriction Kit应与EpiTect Methyl II PCR Arrays和EpiTect Methyl II PCR Assays联合使用，以分析每个样品每次降解的DNA的量并检测基因启动子或其他甲基化的目标DNACpG岛甲基化状态。将降解产物在RT² SYBR^® Green Mastermix中稀释，再分成小份放入阵列孔中。或者是将降解产物分成小份装入不同的含有RT² SYBR^® Green Mastermix的real-time PCR管中。最后，采用推荐的循环程序进行分析。

EpiTect II DNA Methylation Enzyme Kit是EpiTect Methyl II PCR产品线中的一部分，是一种创新技术和多用型工具，用于：

• 甲基化模型分析
• 验证基因组内甲基化分析结果
• 发现癌症和干细胞生物标记物
• 毒理学和流行病学筛查
• 表征基因表达调节
• 表观遗传学DNA甲基化分析