适用于微流体学的miScript PCR系列产品使研究人员能够在Fluidigm BioMark System上使用极少量的起始RNA进行miRNA谱分析实验。使用Fluidigm BioMark System，可在一块芯片上完成至多9216（96 x 96）或2304（48 x 48）次反应的高通量实验。适用于微流体学的miScript PCR系列产品可与96.96或48.48 Dynamic Array IFC兼容。利用该突破性技术，只需10 ng总RNA即可实现准确且全方位的表达分析。一次10 ng cDNA合成反应可用作至多10次预扩增反应的模板。miScript Microfluidics PreAMP Kit可在一次反应中对多达400种miRNA特异性的cDNA靶点进行多重PCR预扩增，每个靶点能实现1000–4000倍的扩增。预扩增的样本随后 可用作miScript Microfluidics PCR Kit的miRNA谱分析模板。

在Fluidigm BioMark System上进行miRNA谱分析需要进行下列3个步骤：

• 使用miScript II RT Kit进行逆转录
• 使用miScript Microfluidics PreAMP Kit和miScript PreAMP Primer Mix进行预扩增
• 使用miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay和miScript Microfluidics PCR Kit进行Real-time PCR

逆转录

miScript II RT Kit中包含两种缓冲液：5x miScript HiSpec Buffer和5x miScript HiFlex Buffer。miScript HiSpec Buffer可简化成熟miRNA至cDNA的选择性转化。miScript HiSpec Buffer是制备用于后续预扩增（使用miScript Microfluidics PreAMP Kit）的cDNA的唯一缓冲液。在使用miScript Microfluidics PreAMP Kit进行预扩增之前，切勿使用miScript HiFlex Buffer。

预扩增

使用miScript Microfluidics PreAMP Kit及相应的miScript PreAMP Primer Mix进行预扩增，可实现miRNA靶点的无偏差扩增。反应包括一个重要的副反应削弱步骤，使real-time PCR中潜在的非特异性反应最小化。对于每种miScript miRNA PCR Array，都有经过确认的专用miScript PreAMP Primer Mix，其中包括可以对芯片靶向的miRNA进行选择性预扩增的引物。

使用miScript Primer Assay进行real-time PCR时，必须将单独的miScript Primer Assay混合，制备miScript PreAMP Primer Mix，进行预扩增。

利用real-time PCR进行miRNA谱分析

预扩增的cDNA可以在使用成熟miRNA特异性的正向引物（包括在miScript miRNA PCR Array中或者作为单独的miScript Primer Assay提供）和miScript Microfluidics PCR Kit进行的real-time PCR分析中用作模板，miScript Microfluidics PCR Kit中包含miScript Microfluidics Universal Primer（反向引物）和Microfluidics qPCR Master Mix（已经过优化，适用于Fluidigm BioMark System，包含可用于检测的EvaGreen染料和ROX参比荧光染料）。miScript miRNA PCR Array（Format M）适用于96.96 Dynamic Array IFC。此项领先的miRNA表达谱分析技术采用了预先干燥的miRNA特异性的正向引物，引物浓度适合在Fluidigm BioMark System上使用。

在Fluidigm BioMark System上使用miScript Microfluidics PCR Kit可实现高通量miRNA表达谱分析，适用于：

• 高通量、成熟miRNA定量和谱分析
• 血清或血浆中的生物标记物发现