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REPLI-g Midi Kit (25)
货 号：150043
产品规格：25T
原 产 地：德国
参考价格：7530 （参考价格，以实际价格为准）
优惠价格：
REPLI-g Midi Kit (25)
150043
对微量或者珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增
- 扩增获得40 µg DNA，产量稳定
- 同时扩增多个基因组位点
- 使用多重置换扩增反应获得可靠结果
- 扩增获得的DNA适用于多种下游应用
- 长期储存不会导致DNA降解
REPLI-g Midi Kit提供优化的试剂，利用多重置换扩增（MDA）技术，对微量或珍贵样本进行高度均一的全基因组扩增（WGA）。50 μl反应体积的常规DNA产量为40 μg，产物的平均长度长于10 kb（在2 kb至100 kb之间）。独特的REPLI-g技术能够从多种类型的微量或珍贵样本中高度均一的进行全基因组扩增，起始样本包括纯化后基因组DNA、新鲜血液或或干 血、口腔拭子、新鲜或冷冻组织或细胞。该方法可便利、准确的扩增基因组DNA，得到的DNA可即用于无需标记的多种下游应用，无需进行纯化或定量检测。与 基于PCR的全基因组扩增技术相比，这种方法的无错配率提高了1000倍，避免出现假阴性或假阳性结果。
独特的REPLI-g技术使用创新的高保真酶Phi29聚合酶，利用多重置换扩增（MDA）技术扩增复杂的基因组DNA， 并结合温和的碱变性，均一的扩增基因组位点。REPLI-g Mini Kit的常规产量为10 µg，如需更多产量，可使用REPLI-g Midi Kit；因为这两个试剂盒的实验方案相同，反应体积也相同。反应体系构建十分简便，仅需约15分钟的手动操作时间，因此REPLI-g技术使用简便、可 靠，适用于对少量或珍贵的样本进行完全、均一的扩增。
扩增原理
REPLI-g利用等温基因组扩增，即多重置换扩增（MDA）技术：随机引物与变性DNA结合，在等温环境中，在Phi29聚合酶的作用下，进行置换合成反应。每个置换的单链作为模板，与引物结合，扩增生成高产量的DNA（参见Schematic representation of REPLI-g amplification）。Phi 29聚合酶为噬菌体衍生酶，具有3'→5'外切酶活性，准确性为Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi29聚合酶与独特的REPLI-g缓冲液体系相配合，能够轻松的打开DNA的二级结构，如发卡结构，所以可确保在扩增过程中，聚合酶正常发挥作用。因此该技术生成的DNA片段长度可达100 kb，没有序列偏差（参见Unbiased amplification with Phi29 polymerase）。
DNA的碱变性
在酶扩增前，必须使基因组DNA变性，这通常是通过高温孵育、或在强碱性条件下进行的。REPLI-g Midi Kit采用温和的碱性环境孵育，使DNA变性，而片段化程度低，突变少。由此扩增获得的DNA十分完整，扩增的片段长，覆盖所有基因组位点和序列。使用 REPLI-g Midi Kit能够获得可靠的结果，确保在下游应用中不出现假阳性或假阴性结果。采用热变性的WGA技术会损伤模板DNA，导致扩增结果不准确（参见Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation）。
便利的单管操作
REPLI-g Midi Kit通过简便、高效的方法从纯化的少量基因组DNA样本或直接从全血、干血卡、白膜层、组织、培养的细胞中进行准确的全基因组扩增（参见REPLI-g Mini and Midi procedure）。加入裂解缓冲液使样本DNA裂解并变性，之后进行短暂孵育（参见REPLI-g Mini and Midi procedure）。中和后加入预混液（包括REPLI-g Mini DNA Polymerase），在30°C过夜进行等温扩增。REPLI-g扩增获得的DNA刻在–20°C长期储存（参见Consistent long-term stability）。
选择适合您实验需求的REPLI-g Kit（参见下表）。
表1. 种类丰富的REPLI-g Kits
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REPLI-g Mini | REPLI-g UltraFast Mini | REPLI-g Midi | REPLI-g Screening | REPLI-g FFPE | REPLI-g Mitochondrial DNA |
| 起始样本 | 纯化后gDNA、血液、细胞 | 纯化后gDNA、血液、细胞 | FFPE组织、FFPE组织中纯化得到的gDNA | 纯化后gDNA | ||
| 起始样本量 | >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) | >10 ng gDNA, 0.5 µl blood or cells (>600 cells/µl) | Section (1 cm diameter, 10-40 µm thick); >100 ng gDNA | >1 ng纯化后gDNA | ||
| 产量（µg/反应） | 10 | 7–10 | 40 | 8 | 标准产量：≤10，高产量≤40 | 3–5 |
| 反应时间（小时） | 10–16 | 1.5 | 8–16 | 12–16 | 标准产量：4，高产量：10 | 8 |
| 手动操作时间（分钟） | 15 | 15 | 15 | 15 | 40 | 15 |
| 规格 | 反应管 | 反应管 | 反应管 | 孔板 | 反应管 | 反应管 |
REPLI-g扩增得到的DNA可用于多种下游应用，包括：
- 使用TagMan引物/探针对的SNP基因分型
- 基于定量PCR或PCR的突变检测
- 二代测序
- STR/微卫星分析
- Sanger测序
- RFLP和Southern印迹分析
- 芯片技术，如比较基因组杂交