miScript PCR System配合SYBR^® Green real-time PCR能够灵敏、特异性的进行miRNA定量和分析。miScript PCR System可以完成从RNA中合成cDNA和后续的real-time PCR检测miRNAs涉及的所有步骤。miScript PreAMP PCR Kit是miScript PCR System的一部分，使得研究者能够使用非常有限量的起始RNA进行miRNA分析实验（参见Janas, M.M. et al. (2012) Reduced Expression of Ribosomal Proteins Relieves MicroRNA-Mediated Repression. Molecular Cell 46, 171.）。这对RNA含量较少的样本是非常必要的，如体液、福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本以及细胞量较少的样本，如激光捕获显微切割（LCM） 样本、流式分选细胞、循环肿瘤细胞和细针穿刺活检样本额。小样本中获得的少量RNA通常不足够进行可靠的miRNA分析实验，即使使用如real- time RT-PCR等灵敏的技术。

miScript PreAMP PCR Kit配合miScript PreAMP Primer Mixes能够对10 ng总RNA进行准确全面地表达分析，是一项重大的技术突破。10 ng的合成cDNA可以作为10个预扩增反应的模板。这样就提供了足够的模板用于多种Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays或多种重复的miRNome miScript miRNA PCR Array，取决于使用的miScript PreAMP Primer Mix。miScript PreAMP PCR Kit使用多功能的、基于PCR的预扩增技术，在一个反应中预扩增400个miRNA特异性cDNA靶点。一般情况下，不论是96-plex或384- plex反应都能扩增2000–4000倍。

少量RNA样本获得miRNA表达谱需要3个步骤：使用miScript II RT Kit进行逆转录，使用miScript PreAMP PCR Kit和miScript PreAMP Primer Mix进行预扩增，以及使用相应的miScript miRNA PCR Array和miScript SYBR Green PCR Kit进行real-time PCR。将miScript PreAMP PCR Kit和miScript PreAMP Primer Mix的预扩增整合入miScript PCR System miRNA表达谱的工作流程，确保了实验方案的可靠性和结果的可靠性和可重复性。

miScript PreAMP Primer Mixes适用于所有miScript miRNA PCR Arrays。也可使用miScript PreAMP PCR Kit配合25个miScript Primer Assays混合液进行预扩增。

预扩增质控

miScript PreAMP PCR Kit包括4个miScript Primer Assays用于预扩增质控实验，用来检验预扩增的cDNA。下表列出了质控和它们的作用。如需获得更多的详细信息，请参考miScript PreAMP Handbook。

miScript PreAMP PCR Kit作为miScript PCR System的一部分，用于：

• 成熟miRNA的定量和谱分析
• 从血清或血浆中发现生物标记物